heparina biotina
Se recogió, liofilizó y utilizó heparina biotinilada para la preparación de chips SA. La heparina biotinilada se inmovilizó en un chip de estreptavidina SA según el protocolo del fabricante. La inmovilización exitosa de la heparina se confirmó observando el aumento de la unidad de resonancia RU en el chip sensor. Habiendo demostrado que la heparina puede prevenir eficazmente la modificación de residuos cruciales para su unión, el siguiente paso fue demostrar que estos residuos podían marcarse de manera eficiente. , biotinilado, tras la disociación de la proteína del azúcar. Higo. 1, FGF-acetilado en ausencia o presencia de perlas de heparina y tampón. Se describe un ensayo de afinidad en solución basado en resonancia de plasmón superficial para medir la Kd de la unión de heparina al heparán. Proteínas de unión a sulfato con una variedad de ligandos. La prueba consiste en pasar una solución preequilibrada de proteína y ligando sobre un chip sensor en el que se ha inmovilizado heparina. Chips sensores de heparina La heparina, un polisacárido sulfatado que pertenece a la familia de los glicosaminoglicanos, tiene muchas actividades biológicas importantes, asociadas con su interacción con diversas proteínas. La heparina se utiliza ampliamente como fármaco anticoagulante debido a su capacidad para acelerar la velocidad a la que la antitrombina inhibe las serina proteasas. Se pasó una solución de conjugado de heparina-biotina sobre el flujo del chip sensor de neutravidina-PEG, ml en HBS-EP en funcionamiento. tampón, caudal 5 μl min. La unión de heparina-biotina al flujo del chip sensor se confirmó observando la respuesta de RU en el flujo. También se examinó la complejación de biotina para determinar su influencia en la unión de heparina. Sin embargo, incluso a concentraciones de biotina en mg ml, suficientes para saturar la avidina, no hubo ningún efecto sobre la unión de heparina. Datos no mostrados. Higo. 5. Especificidad y dependencia del tamaño de la interacción avidina-heparina. El conjugado de heparina-biotina se preparó mediante reacción de sulfo-NHS-LC-biotina con los grupos amino libres de residuos de glucosamina no sustituidos en heparina. Se pasó una solución de conjugado de heparina-biotina, ml en tampón HBS-EP, a través del flujo del chip sensor de neutravidina-PEG, caudal 5 µl min, T 25 C, tampón de ejecución: HBS-EP.